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第281章 变异感染者DNA提取（第2页）

4准备70c温浴。

5使用前检查bufferbl是否有沉淀析出，若出现沉淀，请于70c温浴加热至沉淀完全溶解后再使用。

完成试剂准备工作之后，在钟教授的首肯之下，研究员开始进行dna的提取。

具体操作步骤如下：

1向96圆孔板的每孔中加入20ul蛋白酶k。

2加200ul抗凝全血到96圆孔板中。

~undefed若全血样品体积少于200ul，用pbs补充到200ul。

~undefed若样品为鸟类血，样品用量须低于10ul。

~undefed若需得到rna-free的基因组dna，在步骤3加入bufferbl前加入dnase-free的rnasea（20gl）。

3加200ulbufferbl，注意不要打湿每孔的边缘，用96圆孔硅胶片密封各孔。

4用力混合30s。

53000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。

6在培养箱或烘箱中70c温浴至少10。

73000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到96圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。

8取下96圆孔硅胶片，每孔加入200ul乙醇（96-100）。

9用96圆孔硅胶片密封各孔，用力混匀混合15s。3000rp简短离心使96圆孔硅胶片上的溶液到圆孔板内。启动离心机，当速度达到3000rp后即停止。

10将96孔dna板放到一洁净的96孔16l深孔板。取下圆孔板上的96圆孔硅胶片，将每孔中的溶液转移至96孔dna板中，6000rp离心4。

11丢弃96孔16l深孔板的滤液，将96孔dna板放回到96孔16l深孔板上，每孔加入500ulbufferw1b，用一新的bf-400膜密封96孔dna板，6000rp离心4。

~undefed确认在bufferw1bncentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

12丢弃96孔16l深孔板的滤液，将96孔dna板放回到96孔16l深孔板上，每孔加入850ulbufferw2，用另一新的bf-400膜密封96孔dna板，6000rp离心4。

~undefed确认在bufferw2ncentrate中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

13弃滤液，将96孔dna板放回到96孔16l深孔板上，每孔加入400ulbufferw2，用另一新的bf-400膜密封96孔dna板，6000rp离心4。

14将96孔dna板放在一洁净的96孔16l深孔板上，用bf-400膜密封96孔dna板，6000rp离心15。

15将96孔dna板放在另一洁净的96孔16l深孔板上，每孔加入100-200uleentb或去离子水，室温静置2，用另一新的bf-400膜密封96孔dna板，6000rp离心4洗脱得到dna。

看着最终提取出来的dna样本，钟教授终于露出了满意的微笑

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